脾很重要，那炙红、黄芪是什么？对脾气虚大鼠脑肠功能有啥影响

中医认为“脾为后天之本，气血生化之源”，脾气不足则运化失常，同时“脾在志为思”，脾气既伤则心血耗损，不思饮食；脾的生理状态不仅与水谷运化、行气摄血关系密切，同时对情志有一定影响。

现代研究也表明脾气虚的实质不仅涉及胃肠功能、免疫、血流动力学和机体代谢，而且与脑的功能和能量供给有关。

红芪为豆科植物多序岩黄芪HedysarumpolybotrysHand.-Mazz.的干燥根，黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalusmembrana-ceus (Fisch.)Bge.var. mongholicus (Bge.)Hsiao或膜荚黄芪A. membranaceus (Fisch.)Bge.的干燥根，红芪和黄芪蜜炙的目的主要是增强其补脾益气的作用。

课题组前期研究发现，蜜炙后的红芪与黄芪对脾气虚大鼠的消化及免疫功能有积极的改善作用。

本研究旨在从脑肠互通的角度探讨大鼠脾气虚特点及炙红芪和炙黄芪对其干预作用。

动物 SPF级SD雄性大鼠，体质量(180±20)g，鼠龄6周，购自甘肃中医药大学SPF级实验动物中心。

动物生产许可证号：SCXK(甘)2020-0001。

本研究经甘肃中医药大学动物实验伦理委员会批准(伦理批号：2020-370)。

药品与试剂 大黄，批号：2011053，购自兰州惠仁堂大药房；红芪与黄芪为甘肃武都安化米仓山所采集新鲜药材；经甘肃中医药大学药学院中药鉴定教研室王明伟副教授鉴定，大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheumpalmatum的干燥根与根茎切片，红芪为豆科植物多序岩黄芪H. polybotrys 的干燥根，黄芪为豆科植物蒙古黄芪 A. membranaceusvar.mongholicus的干燥根。

补中益气丸，规格：每丸重9g，批号：2012130，批准文号：国药准字Z62021035;购自兰州佛慈制药股份有限公司。

大鼠白细胞介素6(interleukin6，IL-6)、干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactorα，TNF-α)、环氧合酶-2(cyclooxygenase2，COX-2)、二胺氧化酶(diamineoxidase，DAO)、分泌型免疫球蛋白A(secretoryimmunoglobulinA，SIgA)、多巴胺(dopamine，DA)和血管活性肠肽(vasoactiveintestinalpeptide，VIP)试剂盒，均购自江苏菲亚生物科技有限公司。

仪器 SpectraMaxi3x多功能酶标仪，上海美谷分子仪器有限公司产品。

大黄水煎液：取大黄片0.5kg，加蒸馏水1L，浸泡30min后，煎煮10min，双层纱布过滤，同方法煎煮两次后合并滤液，60℃水浴浓缩为1g·mL-1的溶液，4℃保存备用。

炙红芪和炙黄芪及其水煎液的制备参考课题组前期建立的方法，含生药量1.26g·mL-1。

补中益气丸水煎液：将药丸煎煮浓缩至含生药量1.89g·mL-1，4℃冷藏备用。

模型建立 取40只大鼠用于脾气虚模型复制，模型参考本课题组前期实验的方法建立，采用过度疲劳、限制饮食、苦寒泻下三因素复合造模方法进行模型复制：单日禁食，饮水自由，双日给食量为每只每日75g·kg-1，饮水自由。

每天上午灌胃给予大黄水煎液10mL·kg-1，之后置于(25±1)℃水深50cm的游泳缸中负重游泳至力竭后，将大鼠取出，擦干其身上的水，放回饲养盒，连续造模15d。

游泳负重方式为在大鼠尾巴根部用橡皮筋绑定其体质量10%的保险丝；游泳力竭的判定标准为大鼠鼻部没入水中10s，身体不能自由浮起，连续造模15d。

模型评价每天称取记录各组每只大鼠体质量变化(给药前)，测定大鼠肛温及游泳时间，结合大鼠一般体征变化，倦所扎堆1分；眯眼弓背1分；体质量减轻1分；便形质软1分；便形溏稀2分；肛温下降1分；游泳耐力下降1分，得分5分以上者，模型构建成功。

模型复制成功后，随机分为模型组、炙红芪组、炙黄芪组、补中益气丸组，每组10只；其余10只为空白组。

每天上午炙红芪组、炙黄芪组、补中益气丸组分别灌胃炙红芪水煎液、炙黄芪水煎液、补中益气丸水煎液，灌胃容积为10mL·kg-1，空白组与模型组灌胃同体积蒸馏水，连续给药15d。

大鼠腹腔注射3%戊巴比妥钠(4mL·kg-1)麻醉，用非抗凝真空采血管腹主动脉取血5mL，室温放置3min后放入离心机，4℃下4000r·min-1离心15min，取上清液2mL置于EDTA管中，-20℃冰箱冷藏备用。

采血后，将大鼠脱颈椎处死，从大鼠体内取出胸腺、脾，与其他组织分离干净后，用蒸馏水清洗血污，滤纸吸干多余水分，备用。

用十万分之一分析天平精确称量，分别按公式计算胸腺指数、脾指数。

胸腺指数或脾指数(mg·g-1)=胸腺或脾质量(mg)/体质量(g)。

取大鼠血清，用ELISA检测IL-6、IFN-γ、TNF-α、COX-2、DAO、SIgA、DA和VIP表达水平，严格按照试剂盒说明进行。

用SPSS22.0软件进行统计分析。

计量资料符合正态分布，用x±s表示，用独立样本t检验比较2组差异；不符合正态分布数据，则用Mann-Whitney U检验；多组间比较用单因素方差分析(ANOVA)。

造模组大鼠较空白组明显瘦弱，毛色稀疏发黄，精神萎靡，扎堆弓背明显，眯眼，大便较松软或不成形，泄泻明显。

大鼠造模第3～15天时与空白组体质量差异均有统计学意义(均P<0.01)。

空白组和造模组大鼠肛温分别为(36.31±0.56)和(34.12±0.42)℃;游泳时间分别为(33.50±9.33)和(21.00±3.46)min，差异均有统计学意义(均P<0.05)。

表明模型构建成功。

Modelingdays

Blank(n=10)

Model(n=40)

1

201.87±

5.09

202.73±

4.86

3

210.22±

7.06

202.06±

7.05**

5

219.88±

9.17

194.93±

5.10**

7

234.99±

188.82±

8.35**

9

255.41±

178.90±

7.67**

11

264.37±

176.91±

7.29**

13

270.00±

177.39±

13.04**

15

274.11±

175.53±

10.36**

炙红芪组、炙黄芪组、补中益气丸组分别灌胃炙红芪水煎液、炙黄芪水煎液、补中益气丸水煎液，灌胃容积为10mL·kg-1，空白组与模型组灌胃同体积蒸馏水。

造模大鼠较空白组大鼠体质量显著降低(P<0.01);给药后，模型组大鼠体质量增长较为缓慢，炙黄芪组能够改善脾气虚造成的大鼠体质量下降，差异有统计学意义(P<0.05)，炙红芪组及补中益气丸组对大鼠体质量改善明显(P<0.01)。

模型组大鼠胸腺脾质量、脾质量及腺脾指数、脾指数均较空白组大鼠下降明显(均P<0.01);炙黄芪组较模型组上述指标均明显上升(均P<0.05);炙红芪组大鼠脾指数较模型组有所提升(P<0.05)，胸腺质量、胸腺指数、脾质量均较模型组提升显著(均P<0.01)。

Group

Dose
(g·mL-1)

n

Before
administration(g)

Afteradministration
(g)

Blank

10

274.33±

6.74

326.93±

Model

10

174.71±

6.12##

204.43±

13.33##

HPHR

1.26

10

173.84±

7.06##

244.71±

6.99**

HPAR

1.26

10

173.21±

3.49##

229.81±

26.66*

BZYQ

1.89

10

174.43±

7.31##

260.79±

5.11**

Group

Thymusmass(g)

Thymusindex(mg·g-1)

Spleenweight(g)

Spleenindex(mg·g-1)

Blank

0.44±

0.11

1.35±

0.26

0.77±

0.14

2.34±

0.29

Model

0.10±

0.05##

0.48±

0.23##

0.35±

0.03##

1.68±

0.05##

HPHR

0.27±

0.10**

1.11±

0.42**

0.54±

0.13**

2.21±

0.56*

HPAR

0.24±

0.09*

1.02±

0.36*

0.50±

0.05*

2.20±

0.17*

BZYQ

0.34±

0.02**

1.29±

0.06**

0.60±

0.08**

2.29±

0.26**

模型组较空白组血清IL-6和TNF-α水平显著升高(P<0.01)，给药各组均较模型组水平下降(均P<0.01);模型组IFN-γ水平显著低于空白组，给药后有所上升。

炙红芪组和炙黄芪组对上述指标比较差异无统计学意义。

炙红芪和炙黄芪对脾气虚大鼠肠功能指标和脑功能指标水平的影响

模型组大鼠血清COX-2和DAO水平均显著高于空白组，SIgA水平显著低于空白组(均P<0.01)，给药各组大鼠血清COX-2和DAO水平均较模型组显著降低，但均显著高于空白组(均P<0.01)，SIgA水平较模型组显著升高(P<0.01)。

Group

IL-6
(pg·mL-1)

IFN-γ
(pg·mL-1)

TNF-α
(pg·mL-1)

Blank

63.88±

1.75

1302.14±

119.05±

4.96

Model

98.82±

6.62##

400.71±

62.21##

287.76±

26.78##

HPHR

80.77±

7.57**

671.43±

65.68**

188.10±

13.16**

HPAR

80.42±

3.93**

625.71±

96.58**

210.98±

16.41**

BZYQ

70.23±

2.86**

960.00±

39.05**

140.74±

7.21**

Group

COX-2(pg·mL-1)

DAO(pg·mL-1)

SIgA(μg·mL-1)

DA(pg·mL-1)

VIP(pg·mL-1)

Blank

17.22±

4.77

89.49±

5.81

79.01±

4.99

78.31±

9.85

59.56±

6.67

Model

46.08±

5.52##

158.06±

8.39##

42.01±

4.34##

48.09±

6.66##

142.64±

8.10##

HPHR

27.30±

4.50**

111.65±

6.70**

68.54±

6.33**

71.45±

11.05**

108.35±

6.61**

HPAR

27.86±

3.56**

120.48±

5.43**

59.54±

7.55**

64.33±

4.38*

106.85±

15.78**

BZYQ

21.40±

3.68**

109.97±

6.91**

72.72±

8.33**

67.59±

12.52**

74.29±

4.02**

模型组大鼠血清DA水平较空白组显著降低(P<0.01)，炙红芪组和炙黄芪组较模型组DA水平均有所提升，但炙红芪组更为显著(均P<0.01);模型组大鼠血清VIP水平较空白组显著上升(P<0.01)，炙红芪组和炙黄芪组较模型组均显著降低(均P<0.01)，炙红芪组和炙黄芪组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

本实验采用的三因素造模法中加入了限制饮食这一因素，因此脾气虚大鼠的具体摄食能力无法与空白组对比，与其采用的苦寒破气、游泳力竭双因素法有一定差异，故而未将食量减少这一指标纳入评分标准。

脾气虚大鼠由于摄食量减少、疲劳泄泻导致其免疫指标显著降低，给药各组能够改善脾气虚大鼠体质量及胸腺指数、脾指数，调节大鼠IL-6、IFN-γ、TNF-α和SIgA水平以增强脾气虚大鼠免疫功能；SIgA、COX-2和DAO能够有效反映胃肠道损伤状况，肠黏膜损伤时SIgA水平明显下降，小肠黏膜和绒毛上皮细胞坏死脱落，释放大量DAO参与血液循环，同时，COX-2在炎症反应中表达明显增加，给药对于脾气虚所致的胃肠道损伤有改善作用。

DA水平与脑功能呈明显相关性，可调节运动、情绪及大脑其他活动，在肠内分泌和肠神经功能障碍时，DA水平显著降低，在血流动力学方面，还可提高心率及平均动脉压。

VIP作为一种脑肠肽，对体温、脑血流量、肠道平滑肌等起到调节作用，脾气虚大鼠中VIP含量的显著增加，可能是其血流动力学异常导致VIP代偿性升高，脾气虚大鼠中DA与VIP含量变化，在一定程度上揭示了“脾统血”的科学内涵。

DA、VIP及COX-2功能与脑肠联系紧密，在脾气虚大鼠中异常表达，可能是脾气虚在脑肠互通联系的相关因素，炙红芪和炙黄芪可能通过调节上述指标影响大鼠脑肠功能，达到对脾气虚的治疗作用